Dans tous les cas, un développement microbien satisfaisant est attendu, ce qui est observé par la turbidité du milieu. Limites -Le milieu déshydraté est très hygroscopique, il doit donc être tenu à l'écart de l'humidité. -Le milieu ne doit pas être utilisé si un type de détérioration est observé. -Le milieu de culture déshydraté doit être conservé entre 10 et 35 ° C -Le milieu préparé doit être conservé au réfrigérateur (2-8 ° C). Références Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B et Velázquez O. Techniques d'analyse microbiologique des aliments. 2009, 2e éd. Faculté de chimie, UNAM. Mexique. Version pour l'administrateur des manuels et documents (AMyD) de la Faculté de chimie, UNAM 1. Disponible sur: Laboratoires Britannia. Eau peptonée tamponnée. 2015. Disponible sur: Laboratoires Neogen. Eau peptonée. Disponible sur: Laboratoires Merck. Disponible sur: Laboratoires Conda Pronadisa. Eau peptonée alcaline. Disponible sur: Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott.
Placer ladite portion dans des flacons contenant 225 ml d'eau peptonée. Mélangez et homogénéisez l'échantillon. Si la charge microbienne est suspectée d'être élevée, des dilutions en série ou décimales peuvent être effectuées pour faciliter le comptage des unités formant colonie (UFC). Le nombre de dilutions dépendra du type d'échantillon et de l'expérience de l'analyste. Si, en revanche, la charge microbienne est suspectée d'être très faible, aucune dilution n'est nécessaire. Par la suite, sous-culture sur des milieux sélectifs. Dans le cas des aliments de la mer, tels que les crustacés, les poissons, entre autres, à la recherche de Vibrio cholerae ou d'autres espèces de Vibrio, de l'eau peptonée ajustée à pH 8, 5 (eau peptonée alcaline) doit être utilisée. Contrôle de qualité A partir de chaque lot préparé, un à deux tubes doivent être incubés sans inoculation pendant 24 heures en aérobiose à 37 ° C. À la fin du temps, aucune turbidité ou changement de couleur ne doit être observé. Des souches témoins connues peuvent également être utilisées pour évaluer leur efficacité: Les souches bactériennes suivantes peuvent être utilisées pour cela: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
Laissez reposer environ 5 minutes. Chauffer 1 minute jusqu'à dissolution complète. Verser dans des bocaux appropriés au besoin. Stériliser à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. -Eau peptonée alcaline Peser 25 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau. Procédez comme décrit ci-dessus. Le pH varie de 8, 3 à 8, 7. Utilisation L'inoculum se fait en plaçant directement l'échantillon. Il est utilisé pour diluer les échantillons, en particulier lorsque l'on soupçonne que des bactéries peuvent être endommagées. Habituellement, les dilutions sont de 1:10 et 1: 100. Incuber pendant 24 heures en aérobiose à 35-37 ° C. Échantillons de selles Pour les échantillons de selles pour Salmonella, l'utilisation d'eau tamponnée ou tamponnée est recommandée comme milieu de pré-enrichissement. Pour ce faire, procédez comme suit: Si les selles se forment, prélevez 1 g d'échantillon. S'ils sont liquides, prélever 1 ml de matières fécales et mettre en suspension dans un tube avec 10 ml d'eau peptonée tamponnée.
S'ils sont liquides, prélever 1 ml de matières fécales et mettre en suspension dans un tube avec 10 ml d'eau peptonée tamponnée. Dans le cas des écouvillons rectaux, évacuer le matériel contenu dans l'écouvillon dans le tube avec de l'eau peptonée tamponnée. Dans tous les cas, mélangez et homogénéisez très bien l'échantillon. Incuber à 37 ° C pendant 18 à 24 heures. Subculture par la suite dans un bouillon d'enrichissement tel que le bouillon sélénite cystine ou le bouillon tétrathionate à 37 ° C pendant 18 à 24 heures de plus. Enfin, cultivez dans des milieux sélectifs pour Salmonella, tels que la gélose SS, la gélose XLD, la gélose Hektoen, entre autres. Échantillons alimentaires L'eau peptonée est utilisée comme milieu d'enrichissement ou comme simple diluant, mais si des espèces de Salmonella sont recherchées, elle est utilisée comme milieu de pré-enrichissement, comme déjà décrit. Dans les aliments, procédez comme suit: Pour les aliments solides, peser 25 g de l'échantillon et pour les aliments liquides, en mesurer 25 ml.
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